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HIV抗体、HIV抗原及核酸的检测

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发表于 2011-2-4 15:34 | 显示全部楼层 |阅读模式
一般的艾滋病病毒(HIV)感染检测就是艾滋病初筛的抗体检测。抗体检测包括HIV抗体筛查试验和HIV抗体确认试验两部分,按照《全国艾滋病检测技术规范(试行)》的要求,所有筛查试验呈阳性反应的标本不能出阳性报告,需经艾滋病确认实验室确认HIV抗体阳性后,方可出具HIV抗体阳性确认报告,并按相关规定做好咨询、保密和报告工作。
为什么要早作检测?由于不论在感染阶段或是发病阶段,人体中都带有HIV,每日可有数亿万计的病毒复制和上百亿的宿主细胞被破坏,所以及早作出诊断,不仅可给予病人及时的医疗护理,而且对于防止HIV传播,减少传染性都具有非常重要的意义。

抗体检测的分类:当前采用的初筛方法主要有:酶联免疫试验(ELISA)、明胶颗粒凝集
试验(PA)、斑点印迹(层析或渗滤)试验(国内现在的金标检测法)和免疫荧光试验(IFA)。确认试验主
要用免疫印迹试验(Western blot, WB)家庭用HIV其他快速筛查试验(RST)等。

1.ELISA:检测抗-HIV的ELISA法是国际上应用最早、发展最快、至今在血源
筛查中普遍使用的检测技术。为了保证输血安全,试剂的敏感性不断提高,窗口期
显著缩短,使输血传播HIV的危险性大幅度下降。HIV经输血传播的危险从80年代的
较高水平降至近年的1/440 000~1/600000以下[1]。1985年美国研制成功第1代试剂
(用病毒裂解抗原包被的ELISA间接法),虽然敏感性、特异性均较低,但在防止
输血传播HIV上起到创始作用。为了避免细胞培养蛋白导致的非特异性反应,1990
年,用基因重组和成肽抗原研制成第2代试剂。次年国际上又研制成双抗菌素原夹
心法第3代试剂,灵敏度提高到99%以上,特异度>95%。第3代试剂不仅可检测抗-H
IV IgG,而且可检测早期出现的IgM抗体,并在1996年改进成含有“O”亚型的第3
代试剂。1998年,国际上已出现第4代试剂,在检测抗-HIV的同时也可检测p24抗原
,称为HIV抗原/抗体试剂。第4代试剂目前主要有3种,分别是Vironostika HIV Ⅱ
抗原/抗体、HIV Combi(Boehringer)和HIV DUO(Biomerieux)。正在我国注册的
第4代试剂是荷兰生产的Vironostika HIVⅡ抗原/抗体,其抗原组分为gp160/gp36
/NAT70,同时还包被了一个单克隆抗-p24抗体。由于试剂不断改进,使“窗口期”
逐渐缩短,第1代试剂“窗口期”约为3个月,第2代比第1代平均缩短20 d,第3代
比第2代缩短4~9 d[2],第4代比第3代平均缩短4~7d。我国国产的ELISA试剂起步较
晚,近年来发展也较快,不少厂家已研制出第3代试剂。
2.明胶颗粒凝集试验(PA):PA是一种快速的HIV血清抗检测方法。先将样品
稀释,然后分别加入经抗原致敏的和未致敏的明胶颗粒,混匀后保湿(一般为室温
)。由于操作简便,无需特殊仪器设备,很适合对少量标本的检测。当血清中有H
IV抗体存在时,经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应,根据明胶颗粒
在孔中的凝集情况判读结果。目前已研制出HIV-1和HIV-2抗原共同致敏感的PA试剂
(AFD HIV 1/2 PA)和HIV-1、HIV-2抗原分别致敏的PA试剂(AERODLA-HIV-1/2)
。目前可用于HIV1/2的筛查,后者可用一区分HIV-1型和HIV-2型。

3.斑点印迹(或免疫层析/或渗滤)试验:一般采用硝酸纤维素膜作固相载体
,在载体下面有吸水衬垫可吸收加入的液体。将重组或多肽抗原包被在载体内,加
入待检血清,包被抗原和被检血清中抗体结合,用胶体金(或胶体硒)代替底物连
接在葡萄球菌蛋白A上,金标记蛋白A具有与人Ig结合的能力,因而可与被捕获的H
IV抗体结合。若样品中有3~10min出结果,特异性较好,敏感性约相当于中度敏感
的ELISA,对应急使用和农村偏远地区临床用血检测较为适宜,但不适于城市地区
的献血员筛查。在农村偏远地区临床用血也必须进行HIV检测。目前在国内批准注
册的有:Deter-min HIV1/2(ABBOTT)和Instant CHEK-HIV1+2(EY)2种金标(硒标)
快速诊断试剂。

现在关于试纸检测的准确度产生怀疑,个人认为这是没有必要的,这些试纸都是经过国家的临床验证达到国家标准的 都有国家批准生产批号。

免疫荧光试验(IFA):将HIV感染的淋巴细胞涂于玻片上,经固定后即为
试验用抗原片,待检血清中的抗-HIV抗体与抗原结合后,再与荧光素标记的抗人I
g结合,在荧光显微镜下可见到含草绿色荧光的细胞和多核巨细胞(胞浆荧光)。
目前国内仅在少数有条件和实验室使用。

抗原检测:抗原检测适用于以下几种情况:(1)HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断;(2)HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断;(3)第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应,但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断;(4)监测病程进展和抗病毒治疗效果

因此一般情况下很少用抗原检测。

核酸检测:HIV核酸检测有定性和定量两类,前者用于HIV感染的辅助诊断,后者常用于监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效果。其定性检测通常根据扩增产物的电泳图像判定结果,阳性结果还要进行核酸序列测定来确定:(1)HIV核酸检测阴性, 只可报告本次实验结果阴性,不可排除HIV感染;(2)HIV核酸检测阳性, 可作为诊断HIV感染的辅助指标,不单独用于HIV感染的诊断;(3)报告核酸定性检测结果时应注明反应条件和所使用的引物序列。定量检测:(1)按照仪器读数报告结果,应注明使用的试验方法、样品种类和样品量;(2)测定结果小于最低检测限时,应注明最低检测限水平。注意低于最低检测限的结果不能排除HIV感染;(3)应附上仪器打印的数据。
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发表于 2011-2-4 17:25 | 显示全部楼层
学习一下
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发表于 2011-2-4 23:25 | 显示全部楼层
检测知识普及帖
大家可以来看看
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发表于 2011-2-5 02:07 | 显示全部楼层
怕怕。。。
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发表于 2011-3-5 10:29 | 显示全部楼层
爱滋病传染性强
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发表于 2011-4-3 11:56 | 显示全部楼层
很好的科普知识,学习了,来支持一下~
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发表于 2012-6-27 17:08 | 显示全部楼层
健康QQ``我想问下 我8周做的核酸 结果是小于40 参考是是小于40
根据您的原话  ;(2)测定结果小于最低检测限时,应注明最低检测限水平
我是不是也不能排除了????
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